באַניץ און פּריקאָשאַנז פון ולטראַפילטראַטיאָן סענטריפוגע רער
1) קלייַבן אַ פּאַסיק ולטראַפילטראַטיאָן רער.באַמערקונג אַז UF מעמבריינז זענען אַנדערש אין זייער טאָלעראַנץ מדרגה צו פאַרשידן קעמיקאַלז.טיפּיקאַללי, ולטראַפילטריישאַן טובז מיט אַ 10 kDa מאָלעקולאַר וואָג שנייד-אַוועק קענען זיין אויסגעקליבן מיט אַ מאָלעקולאַר וואָג שנייַדן-אַוועק וואָס זאָל נישט זיין גרעסער ווי 1/3 פון די מאָלעקולאַר וואָג פון די פּראָטעינס פון אינטערעס, אַזאַ ווי 35 kDa.אויב די מאָלעקולאַר וואָג פון די פּראָטעינס פון אינטערעס איז אַרום 10 קד, אַ ולטראַפילטראַטיאָן רער מיט אַ מאָלעקולאַר וואָג שנייד-אַוועק פון 3 KD קענען זיין געוויינט.
(2) די אַלטראַפילטריישאַן, פרעשלי געקויפט, איז טרוקן, מיט הינטער-פּורע וואַסער צוגעגעבן איידער נוצן און וואַסער גאָר דורכגעגאנגען דורך די מעמבראַנע, ייַז וואַנע אָדער פרידזשידער פאַר קולד פֿאַר אַ ביסל מינוט.דאס וואסער ווערט דאן אפגעגאסן, דאס הייסט די פראטעין פליסיקייט, און וויפיל מען לייגט צו, וועלכער איז נישט מער ווי די ווייסע ליניע אין שפיץ פון די רער.די אָפּעראַציע איז ליכט, און די ולטראַפילטריישאַן רער דאַרף זיין פּריקאָולד אויף אייז איידער אַדינג די פּראָטעין לייזונג.
3) סײַ די מאַסע און סײַ די גראַוויטי־צענטער זאָלן דערגרייכן דעם וואָג.באַמערקונג די ראָוטיישאַנאַל גיכקייַט און אַקסעלעריישאַן זענען נישט זייער שנעל, אַנדערש גלייך דאַמידזשינג די ולטראַפילטראַטיאָן מעמבראַנע.סענטריפיוגאַל אַלטראַפילטריישאַן איז סטאַרטעד (סענטריפוגע פּריקאָולד צו 4 דיגריז).נאָך די רפּם פון פאַרשידענע סענטריפוגעס איז קאָנווערטעד צו ג, עס איז געווען אַנדערש.די אַקסעלעריישאַן פון די סענטריפוגע איז אַדזשאַסטיד צו אַ מינימום, רידוסינג די דרוק אויף די מעמבראַנע.באַמערקונג, זיין זיכער צו לאָזן די סענטריפודזש נאָך די סענטריפודזש האט ריטשט זייַן דעסטיניישאַן גיכקייַט, אָדער אויב איר האָבן אַ פּראָבלעם, איר קענען נישט שעפּן עס פֿאַר די ערשטער מאָל.די אָריענטירונג פון די מעמבראַנע צו די שפּינדל איז אַדזשאַסטיד לויט די ינסטראַקשאַנז (ווינקל סענטריפודזש פאַל איז פּערפּענדיקולאַר מעמבראַנע צו אַקס).אין פּראַקטיש נוצן, די אַלגעמיינע ראָוטיישאַן גיכקייַט איז נידעריקער ווי אין די ינסטראַקשאַנז, אַזוי אַז די לעבן פון די סענטריפודזש רער קענען זיין עקסטענדעד.
3) סײַ די מאסע און סײַ די גראַוויטי־צענטער זאָלן דערגרייכן דעם וואָג.באַמערקונג די ראָוטיישאַנאַל גיכקייַט און אַקסעלעריישאַן זענען נישט זייער שנעל, אַנדערש גלייך דאַמידזשינג די ולטראַפילטראַטיאָן מעמבראַנע.סענטריפיוגאַל אַלטראַפילטריישאַן איז סטאַרטעד (סענטריפודזש פּריקאָולד צו 4 דיגריז).נאָך די רפּם פון פאַרשידענע סענטריפוגעס איז קאָנווערטעד צו ג, עס איז געווען אַנדערש.די אַקסעלעריישאַן פון די סענטריפוגע איז אַדזשאַסטיד צו אַ מינימום, רידוסינג די דרוק אויף די מעמבראַנע.באַמערקונג, זיין זיכער צו לאָזן די סענטריפודזש נאָך די סענטריפודזש האט ריטשט זייַן דעסטיניישאַן גיכקייַט, אָדער אויב איר האָבן אַ פּראָבלעם, איר קענען נישט שעפּן עס פֿאַר די ערשטער מאָל.די אָריענטירונג פון די מעמבראַנע צו די שפּינדל איז אַדזשאַסטיד לויט די ינסטראַקשאַנז (ווינקל סענטריפודזש פאַל איז פּערפּענדיקולאַר מעמבראַנע צו אַקס).אין פּראַקטיש נוצן, די אַלגעמיינע ראָוטיישאַן גיכקייַט איז נידעריקער ווי אין די ינסטראַקשאַנז, אַזוי אַז די לעבן פון די סענטריפודזש רער קענען זיין עקסטענדעד.
(4) ווען קאַנסאַנטרייטאַד צו די רוען 1 מל, נעמען 50ul פון באַפער לייזונג, לייגן 10ul פון לויפן דורך און זען אויב עס איז אַ בלוי קאָליר, ווי אַ משפט צי די ולטראַפילטריישאַן רער פעלנדיק פּראָטעין.אויב די רער איז ליקי, גיסן די אויבערשטער שיכטע און לויפן אין אַ נייַ רער צו אָנהייבן אַלטראַפילטריישאַן.צו באַשליסן פּונקט אויב טובז זענען מיסט, סענטריפודזש פֿאַר 10 מינוט מיט 5 מגמל BSA איידער די לויפן דורך, פליסנדיק אויף פּראָטעין קליי, אָדער בראַדפאָרד גראָב אַסייַ, און פאָרזעצן דורך אַדינג די רוען קאַנסאַנטרייטאַד פּראָטעין לייזונג (וואָס אַפּערייץ אויף אייז און פּריווענץ פּראָטעינס פון באַהיצונג) ביז אַלע פון די קאַנסאַנטרייט איז צוגעגעבן.נעמען זאָרג בעשאַס סענטריפוגיישאַן אויב אָפּזאַץ פון פּראָטעינס אַקערז, וואָס פירן צו רער קלאָוזשער.אויב אָפּזאַץ אַקערז, באַשטימען צי די ספּעציפיש סיבה פון אָפּזאַץ איז אַ יבעריק פּראָטעין קאַנסאַנטריישאַן אָדער אַ ינאַפּראָופּרייט באַפער;די ערשטע קענען זיין סאַלווד דורך אַלטראַפילטריישאַן פון קייפל ולטראַפילטריישאַן טובז סיימאַלטייניאַסלי, דיקריסינג די קאַנסאַנטריישאַן, און די יענער דורך יקסטשיינדזשינג פאַרשידענע באַפער סאַלושאַנז ביז קיין אָפּזאַץ פון פּראָטעין אַקערז.
(4) ווען קאַנסאַנטרייטאַד צו די רוען 1 מל, נעמען 50ul פון באַפער לייזונג, לייגן 10ul פון לויפן דורך און זען אויב עס איז אַ בלוי קאָליר, ווי אַ משפט צי די ולטראַפילטריישאַן רער פעלנדיק פּראָטעין.אויב די רער איז ליקי, גיסן די אויבערשטער שיכטע און לויפן אין אַ נייַ רער צו אָנהייבן אַלטראַפילטריישאַן.צו באַשליסן פּונקט אויב טובז זענען מיסט, סענטריפודזש פֿאַר 10 מינוט מיט 5 מגמל BSA איידער די לויפן דורך, פליסנדיק אויף פּראָטעין קליי, אָדער בראַדפאָרד גראָב אַסייַ, און פאָרזעצן דורך אַדינג די רוען קאַנסאַנטרייטאַד פּראָטעין לייזונג (וואָס אַפּערייץ אויף אייז און פּריווענץ פּראָטעינס פון באַהיצונג) ביז אַלע פון די קאַנסאַנטרייט איז צוגעגעבן.נעמען זאָרג בעשאַס סענטריפוגיישאַן אויב אָפּזאַץ פון פּראָטעינס אַקערז, וואָס פירן צו רער קלאָוזשער.אויב אָפּזאַץ אַקערז, באַשטימען צי די ספּעציפיש סיבה פון אָפּזאַץ איז אַ יבעריק פּראָטעין קאַנסאַנטריישאַן אָדער אַ ינאַפּראָופּרייט באַפער;די ערשטע קענען זיין סאַלווד דורך אַלטראַפילטריישאַן פון קייפל ולטראַפילטריישאַן טובז סיימאַלטייניאַסלי, דיקריסינג די קאַנסאַנטריישאַן, און די יענער דורך יקסטשיינדזשינג פאַרשידענע באַפער סאַלושאַנז ביז קיין אָפּזאַץ פון פּראָטעין אַקערז.
(5) דער ערשטער ביסל סטעפּס זענען געניצט צו קאַנסאַנטרייט דעם פּראָטעין, און אויב די באַפער איז צו זיין געביטן, דזשענטלי לייגן נייַ באַפער (ולטראַפילטראַטיאָן דורך אַ 0.22ום אַלטראַפילטריישאַן מעמבראַנע) צו וועגן 1 מל פון גאַנץ פּראָטעין, און ריקאַנסאַנטרייט צו וועגן 1 מל פֿאַר דריי קאָנסעקוטיווע מאָל, מיט די לעצט קאַנסאַנטרייטאַד לעצט באַנד דיפּענדינג אויף דער געוואלט פּראָטעין קאַנסאַנטריישאַן, בכלל נישט מער ווי 500ul, אָבער אויך צו ין 200ul.דערגרייכן 1000 × אָדער מער אין דרייַ מאל, יסענשאַלי ווי פיל באַפער טוישן, ווי קאַלקיאַלייטיד דורך בייַ מינדסטער 10 × אָדער אַזוי באַנד ענריטשמענט יעדער מאָל.
(5) דער ערשטער ביסל סטעפּס זענען געניצט צו קאַנסאַנטרייט דעם פּראָטעין, און אויב די באַפער איז צו זיין געביטן, דזשענטלי לייגן נייַ באַפער (ולטראַפילטראַטיאָן דורך אַ 0.22ום אַלטראַפילטריישאַן מעמבראַנע) צו וועגן 1 מל פון גאַנץ פּראָטעין, און ריקאַנסאַנטרייט צו וועגן 1 מל פֿאַר דריי קאָנסעקוטיווע מאָל, מיט די לעצט קאַנסאַנטרייטאַד לעצט באַנד דיפּענדינג אויף דער געוואלט פּראָטעין קאַנסאַנטריישאַן, בכלל נישט מער ווי 500ul, אָבער אויך צו ין 200ul.דערגרייכן 1000 × אָדער מער אין דרייַ מאל, יסענשאַלי ווי פיל באַפער טוישן, ווי קאַלקיאַלייטיד דורך בייַ מינדסטער 10 × אָדער אַזוי באַנד ענריטשמענט יעדער מאָל.
פּאָסטן צייט: נאוועמבער-09-2022